EN
Exosome Product Reagents
組織外泌體研究聚焦于特定組織來源的細胞外囊泡EVs，從組織層面為深入了解EVs的功能和應用提供了獨特視角。 組織EVs的分離相較于細胞上清和體液等樣本存在很多難點，本試劑盒專門用于解決各類新鮮組織來源EVs的高效分離純化，例如腫瘤組織、心臟組織、腦組織、肺組織、肝組織、腸道組織、腎臟組織、脾臟組織、肌肉組織等，得到的組織EVs 可用于電鏡TEM、nanoFCM/RPS/NTA粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細胞實驗和動物實驗等。
組織外泌體研究聚焦于特定組織來源的細胞外囊泡EVs，從組織層面為深入了解EVs的功能和應用提供了獨特視角。目前組織來源EVs研究主要聚焦于：1）聯合體液外泌體篩選疾病特異性EVs標志分子；2）組織EVs介導的組織損傷修復、致病機制以及器官間通訊研究；3）將易獲取的組織EVs作為工程化EVs原料進行小分子、小核酸、多肽等貨物裝載遞送。
組織EVs的分離相較于細胞上清和體液等樣本存在很多難點，本試劑盒專門用于解決各類新鮮組織來源EVs的高效分離純化，例如腫瘤組織、心臟組織、腦組織、肺組織、肝組織、腸道組織、腎臟組織、脾臟組織、肌肉組織等，得到的組織EVs 可用于電鏡TEM、nanoFCM/RPS/NTA粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細胞實驗和動物實驗等。
| Exosupur?組織外泌體分離試劑盒 | 貨號 | 規格 | 應用 |
| ES9T-01 | 500mg | 對500mg以內新鮮組織樣本進行外泌體分離純化 | |
| ESS9T-02 | 500mg*5T | 5T，單個Test最大可對500mg新鮮組織，共計2.5g組織樣本進行外泌體分離純化 |
本試劑盒專門用于解決各類新鮮組織來源EVs的高效分離純化，例如腫瘤組織、心臟組織、腦組織、肺組織、肝組織、腸道組織、腎臟組織、脾臟組織、肌肉組織等。
如外泌體電鏡效果不佳，或想要更高純度的外泌體，4.6步得到的上清液（組織EVs粗提物）可進行分子尺寸排阻色譜(推薦Exosupur? ES9P11e)或者進行100,000 g以上超高速離心再次純化。
1、主要的試劑EMix和bufferPI均為進口試劑，是經過恩澤康泰多年組織外泌體分離服務驗證過的試劑；
2、EMix溶液：多種解離酶混合液，可溫和且快速地解離各類組織；
3、bufferPI ：為組織裂解產物提供外泌體樣本保護，避免外泌體降解。
4、配備了過濾組織解離殘渣的70μm濾膜，初步去除細胞及大的細胞碎片。
5、試劑盒中配備的外泌體分離試劑，基于自主專利開發(專利號:ZL201811302563.0)，可快速、高效完成外泌體的分離，可用于基本表征分析、核酸分析、蛋白分析、細胞實驗和動物實驗等，也可進一步結合排阻或超離等方法進行高純度組織外泌體分離。
使用本試劑盒對凍存的腎臟組織和腫瘤組織進行EVs純化，結果如下所示：
建議使用新鮮組織分離得率更高、效果更好：活體取材后立即剔除結締組織和脂肪組織等非研究所需的組織類型，使用預冷的無菌PBS或生理鹽水清洗血水污漬等，用無菌紗布/吸水紙等吸干表面的液體。如果暫時不處理，請將組織于4℃短暫保存，保存時間不宜超過6-8h。
如外泌體電鏡效果不佳，或想要更高純度的外泌體，4.6步得到的上清液（組織EVs粗提物）可進行分子尺寸排阻色譜(推薦Exosupur? ES9P11e)或者進行100,000 g以上超高速離心再次純化。推薦組合：ES9T-02 + ES9P11e。
1. 如何判斷組織解離時孵育時間是否合適？
不同組織的硬度和細胞外基質（ECM）含量不同，會影響解離時間。像肝臟、脾臟等軟組織，細胞外基質相對較少，解離時間較短，按照說明書中建議的15min即可。而肌肉、纖維結締組織等硬度大、細胞外基質豐富的組織，解離時間可適當延長到20min。以顯微鏡下細胞呈單分散狀態、無明顯團塊（說明解離較充分），且細胞活性不受影響為宜(活細胞率>80%，說明沒有過度解離)。
2. 加入A液和B液混勻后，4℃靜置孵育最長多久？
建議12h起，但不建議超過24h。
3. 孵育過夜離心之后無沉淀，這個現象正常嗎？
由于某些組織的解離上清外泌體含量比較低，加了A液和B液離心之后肉眼無法觀察到沉淀，建議：a.離心前根據離心后外泌體所在大致位置進行標記，以便后續棄去上清時減少損失。b.離心后在重懸時使用 PBS仔細吹打離心管壁四周和底部；提取后的外泌體應先進行 NTA/NanoFCM 顆粒濃度或 BCA 蛋白定量檢測，再決定是否進行后繼實驗。
詳情見：https://www.mybeckman.cn/resources/technologies/centrifugation/principles/rotor-types。
4. 提取外泌體時離心機離心力達不到10000g？
建議離心力可以減少到6000g并4℃離心60min。時間的減少或者離心力的降低對于回收率有一定的影響，可以根據自己樣本情況，進行評估。
5. 重懸體積只能是初始上清的 1/20-1/30 嗎？
不建議濃縮倍數太高的原因是，重懸時難以溶解，如果后續進行Exosupur?分離時可能會堵塞排阻柱導致流速較慢。若上清較稀（顆粒或BCA濃度較低），可使用初始上清的1/30體積PBS重懸，后續Exosupur?分離時上樣建議顆粒濃度＞5E+10 particles/mL以提高排阻收率。
6. 外泌體重懸時沉淀較難溶解？
出現這種情況可能是上清濃度較高，濃縮倍數過大造成。建議先加入少許體積如0.14 mL，反復吹打嘗試溶解，溶解后再補至需求體積吹打混勻，仍存在未完全溶解的現象時建議可室溫靜置30min后再次重懸，為增加得率盡可能混勻。
如上述操作后上清液中仍有大量沉淀可離心多次至無明顯沉淀，每次取離心上清液于新離心管中。
7. 組織EVs粗提物使用分子尺寸排阻色譜SEC法進一步純化，按照Exosupur?說明書進行操作嗎？
m 單管EVs粗提物進行后續SEC純化，需要先用PBS稀釋到1ml，按照ES9P11e說明書進行操作。
m 如果提取了相同樣本的多管組織EVs粗提物，多管可合并，合并后如不足1ml用PBS稀釋到1ml，按照ES9P11e說明書進行操作。
SEC純化出來的外泌體(合并建議收集的餾分)進行超濾濃縮時建議用PBS清洗2遍，即將餾分轉移至超濾管先濃縮到所需體積，然后再補PBS至4mL，吹打外泌體進行清洗，4000g離心，重復清洗2次，最后離心至所需體積。（離心時間根據樣本濃度而異，一般5-10min）
技術支持：service@echobiotech.com；市場合作：marketing@echobiotech.com
北京市大興區寶參南街華潤生命科學園1號樓108
