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ExoCoupl^? 外泌體表面修飾生物正交偶聯(lián)試劑盒，是恩澤康泰開發(fā)的基于生物正交反應(yīng)實(shí)現(xiàn)外泌體表面修飾的試劑盒。首先通過(guò)室溫生物正交反應(yīng)在外泌體表面添加活性基團(tuán)，再通過(guò)活性基團(tuán)與疊氮鍵（N3）的反應(yīng)，將與疊氮偶聯(lián)的小分子/多肽/核酸等有效成分共價(jià)結(jié)合到外泌體外表面，實(shí)現(xiàn)外泌體的表面修飾。疊氮偶聯(lián)的有效成分合成比較方便，無(wú)電性、分子類型等限制，合成后使用本試劑盒即可連接在外泌體表面。

本偶聯(lián)試劑盒操作便捷，僅需2步共孵育和2步純化操作，外泌體表面裝載效率高可媲美脂錨共孵育，但非特異性吸附更低。

1、治療性小分子、小核酸、多肽等有效成分的外泌體裝載；

2、提高外泌體靶向性的靶向肽表面裝載，比如腦神經(jīng)靶向肽RVG、缺血心肌靶向肽IMTP、泛癌或炎性細(xì)胞靶向肽iRGD等。

 

1、操作便捷，僅需2步共孵育和2步純化操作，即可完成外泌體表面裝載；



2、外泌體表面裝載效率高，比如對(duì)于靶向肽外泌體表面裝載，本試劑盒裝載陽(yáng)性率可媲美脂錨共孵育。

3、本試劑盒采用2步法標(biāo)記的方式，負(fù)載目的分子非特異性吸附更低，背景噪音更低。

4、本試劑盒不限制負(fù)載的目的分子種類，用戶自備的N3標(biāo)記的小分子、多肽、核酸均可以，且合成便捷，當(dāng)然目的分子小于4KD負(fù)載效率更高，為了方便測(cè)定載量建議同時(shí)帶上N3和FITC/FAM等熒光基團(tuán)。

首先合成N3和FITC標(biāo)記的腦神經(jīng)靶向肽RVG（FITC-RVG-K-N3），使用本正交偶聯(lián)試劑盒（Cat#EC-01-01）對(duì)恩澤康泰貨架產(chǎn)品293F外泌體（Cat#CTE-06）按照說(shuō)明書處理，以將RVG靶向肽修飾在外泌體表面。同時(shí)，另取一份用293F外泌體（Cat#CTE-06），使用RVG脂錨靶向肽（Cat#EA-06-1）將攜帶FAM熒光的RVG靶向肽同樣展示在外泌體表面。

1、負(fù)載率對(duì)比：通過(guò)NanoFCM檢測(cè)RVG多肽負(fù)載陽(yáng)性率（負(fù)載上RVG的外泌體顆粒數(shù)/所有外泌體顆粒數(shù)）。

如下圖所示，結(jié)果顯示：1）2種方法均可將RVG多肽修飾到外泌體表面，且負(fù)載陽(yáng)性率相當(dāng)；2）正交偶聯(lián)試劑盒負(fù)載時(shí)本底信號(hào)更低。




2、將上述2種方法得到的RVG修飾的293F外泌體，脂錨方法得到外泌體命名為“脂錨RVG-外泌體”，正交偶聯(lián)方法得到外泌體命名為“偶聯(lián)RVG-外泌體”，未進(jìn)行RVG修飾的外泌體命名為“對(duì)照293F外泌體”，將上述3組外泌體進(jìn)行紅色熒光標(biāo)記后，分別處理小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞Neuro2a細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞，細(xì)胞流式檢測(cè)細(xì)胞對(duì)外泌體攝取率。

結(jié)果顯示：2種方法得到的表面修飾有腦神經(jīng)元靶向肽RVG的外泌體均可提升Neuro2a細(xì)胞對(duì)外泌體的攝取效率；而另外一組不表達(dá)RVG受體蛋白的前列腺癌細(xì)胞對(duì)照，則沒(méi)有顯示出攝取率差異。



注：

1.避免反復(fù)凍融。

2.非產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題，不接受退換貨。

3.驗(yàn)證數(shù)據(jù)僅供參考，不作為交付標(biāo)準(zhǔn)。

4. 用戶需要自行合成帶熒光基團(tuán)且疊氮鍵偶聯(lián)的藥物分子，若合成有困難可以聯(lián)系技術(shù)支持為您推薦合成供應(yīng)商；

5. 建議目的分子的分子量MW不大于4 kD，以得到最佳的偶聯(lián)效果。若分子量較大，可以在實(shí)驗(yàn)步驟5中適當(dāng)增加投量，初始建議的投量計(jì)算方式為MW*10/4000 μl （N3-目的分子-FITC的濃度為1 mg/ml）。

6. 袖珍柱最大上樣體積不超過(guò)600 μl。 

7. 液體溶液使用前請(qǐng)震蕩混勻，操作時(shí)注意避光。

8. 保質(zhì)期：1年。

1、  使用多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光后，如何計(jì)算載量？

將合成的已知濃度(1000μg/ml)的N3 -目的分子-FITC溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品，取20μl加入180μl 通用緩沖液稀釋10倍為100μg/ml，而后依次取100μl加入100μl通用緩沖液中，經(jīng)2倍倍比稀釋為7個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品各自混勻；外泌體終產(chǎn)物樣本使用通用緩沖液稀釋約 2-10 倍至 100μl混勻；各濃度標(biāo)準(zhǔn)品和樣本均取 80μl 加至 96 孔板，用多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度（激發(fā)光 488nm，發(fā)射光 515nm-535nm）。

u  根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光值和相應(yīng)濃度（μg/ml），得到標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=Ax+D

u  稀釋的外泌體終產(chǎn)物酶標(biāo)儀檢測(cè)熒光值：B（EU）

u  外泌體終產(chǎn)物稀釋倍數(shù)：n

u  N3 -目的分子-FITC的分子量：M（Da）

u  外泌體終產(chǎn)物總量：BCA 檢測(cè)濃度為C（μg/ml）

那么，單位外泌體脂錨靶向肽總載量（nmol/mg）=[(B-D)/A] *n/M/C*1000000

2、  負(fù)載后的外泌體如何保存？

為獲得最佳結(jié)果建議盡可能使用新鮮樣本，但由于實(shí)驗(yàn)條件的限制，可能無(wú)法每次都能使用新鮮樣本。為保證陽(yáng)性顆粒占比建議4℃放置3天內(nèi)，最多不能超過(guò)7天，-20℃放置2周內(nèi)，樣本盡可能避免反復(fù)凍融（冷凍前可適量分裝）。

ExoCoupl EC-01-02 EVs表面修飾生物正交偶聯(lián)試劑盒說(shuō)明書.pdf

ExoCoupl^?試劑盒引用文獻(xiàn)：

Lin H, Yin L, Liu W, et al. Muscle-Derived Small Extracellular Vesicles Mediate Exercise-Induced Cognitive Protection in Chronic Cerebral Hypoperfusion. Adv Sci (Weinh). Published online April 24, 2025. doi:10.1002/advs.202410209     IF14.1  1區(qū)     文獻(xiàn)下載鏈接：https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202410209

用途：使用恩澤康泰ExoCoupl?外泌體表面修飾生物正交偶聯(lián)試劑盒，將試劑盒中包含的N3-FITC對(duì)照品按照操作說(shuō)明修飾到外泌體表面，以對(duì)外泌體進(jìn)行FITC熒光標(biāo)記修飾。而后靜脈注射獲取組織，切片后對(duì)外泌體進(jìn)行Ex Vivo示蹤。

結(jié)果：Fluorescein Isothiocyanate (FITC)+ sEVs can also be detected in the hippocampus (Figure S2C, Supporting Information).