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Exosupur^? 外泌體純化袖珍柱-二次純化

Exosupur^? 外泌體純化袖珍柱試劑盒在分子篩SEC的基礎上增加了多模式吸附功能，用于外泌體的分離純化時具有純度高、回收率高、高效除雜、可重復性強、外泌體完整性好、操作簡單、對設備要求低等優點，可在45min內完成外泌體的分離純化?？蓱糜谕饷隗w染色、標記、小分子負載后，去除體系中游離染料、熒光抗體、小分子等雜質。

概述: Exosupur^?外泌體純化袖珍柱試劑盒在分子篩SEC的基礎上增加了多模式吸附功能，用于外泌體的分離純化時具有純度高、回收率高、高效除雜、可重復性強、外泌體完整性好、操作簡單、對設備要求低等優點，可在45min內完成外泌體的分離純化。

規格

產品	貨號	規格
Exosupur^?外泌體純化袖珍柱試劑盒	CTE-ES9016	0.1-0.5ml*6pcs
Exosupur^?外泌體純化袖珍柱試劑盒	CTE-ES9011	0.1-0.5ml*1pcs

應用

1. 染色后的外泌體進行游離染料的去除；

2. 熒光抗體標記后的外泌體進行游離熒光抗體的去除；

3. 外泌體負載小分子后游離小分子的去除；

4. 對于純度很低的EV粗純物的進一步純化以提升純度。

優勢

1.操作簡便：無需特殊設備，直接孵育離心便可完成外泌體的分離，動手時間15min；

2.顆?；厥章矢撸憾位厥招蕛H收E1組分便可回收超過60%的外泌體顆粒；

3.除雜效率高：對于游離染料、熒光抗體、小分子等的去除效率超90%；

4.對樣本無稀釋作用：只收集E1樣本，不會對樣本造成稀釋；

5. 性價比高：可對純化柱進行清洗再生，重復5次使用。

產品特點及數據展示

1. 產品操作簡單

2. 顆?；厥招矢?/strong>

對不同體積的熒光孵育后的外泌體進行上樣收集E1和E2，測定顆粒數，結果如下圖1，上樣100μl的情況下，顆粒總回收率（E1+E2的顆粒數/上樣顆粒數）近80%。

圖1.Exosupur^?袖珍柱純化熒光外泌體的顆?；厥招?/span>

3. 雜質去除效率高

對熒光標記后的外泌體進行不同體積上樣，收集E1和E2，并經酶標儀檢測熒光值，計算E1（1-E1熒光值/上樣熒光值）或E2（1- E2熒光值/上樣熒光值）組分的游離染料去除效率，上樣100ul情況下去除效率超99%。

圖2. Exosupur^?袖珍柱純化熒光標記外泌體的游離染料去除率

4. 熒光染色外泌體純化相關實驗測試

考慮到熒光染料標記外泌體進行體內外示蹤是外泌體科研工作者幾乎都要涉及的實驗，但常規使用超濾等方法去除游離熒光染料時效果不佳，游離染料殘留較多。我們將熒光染料標記外泌體后進行Exosupur?袖珍柱二次純化的一些參數進行了進一步測試，主要測試了親脂性熒光染料濃度是否影響游離染料去除效果，和重復使用是否影響顆?；厥章?。

以不同濃度染料（2μg/ml-200μg/ml）分別上樣100μl到Exosupur^?袖珍柱，收集E1，酶標儀檢測染料原液和回收液E1的熒光值，計算染料去除率，如圖3所示?？梢?，染料濃度在10μg/ml以上時，Exosupur?袖珍柱的游離染料去除率穩定在98-99%以上。

圖3. 不同濃度熒光染料上樣對Exosupur^?袖珍柱雜質去除率的影響

分別使用5μg/ml和25μg/ml的親脂性熒光染料標記外泌體后，上樣100μl到Exosupur?袖珍柱，收集E1，通過納米流式測定顆粒數，計算顆?；厥章?，將Exosupur?袖珍柱再生后繼續重復幾次實驗，如圖4所示?？梢?，不管使用低濃度還是中高濃度熒光染料標記的外泌體，使用Exosupur?袖珍柱進行幾次重復實驗，顆?；厥章氏鄬^穩定，約在60%以上。

圖4. Exosupur^?袖珍柱使用次數對顆?；厥章实挠绊?/p>

5. 外泌體表征

經Exosupur^?二次純化后的外泌體進行三陽一陰WB檢測和電鏡TEM檢測，顯示不影響其生物學特征。

圖5. Exosupur^?袖珍柱純化樣本三陽一陰外泌體標志物分析

圖6. Exosupur^?袖珍柱二次純化后的TEM電鏡分析

常見問題

Q：該產品跟Exosupur^?其他的分離試劑盒有何區別?
A：該產品在原理上有升級，更適合微量樣本的分離，處理樣本體積為0.1~0.5ml，主要用于外泌體的二次純化。其他SEC為原理的Exosupur^?試劑盒主要用于大體積樣本的分離，處理樣本體積為0.2ml~10ml不等。

Q：上樣量到底如何選擇？
A：不同分離目的、不同樣本體積的分離參數見圖1-4，可以根據各自實驗中的目的選擇更高收率還是更高除雜率。如二次純化時，50μl-500μl上樣均能達到50%以上的收率（超濾一般為30%）和超過90%的除雜率；

Q：操作過程中有何注意事項？
A：首先盡量保持管內填料處于濕潤狀態，離心后立即加液，如果不立即再生先加入緩沖液將下蓋和螺旋蓋子蓋上擰緊暫時儲存。其次，收到離心柱開始操作之前或操作過程中，若不小心將填料弄到管蓋，可以加PBS清洗離心至管內。

Q：袖珍柱的清洗液1M NaOH 30%異丙醇，如何配置？
A：1M NaOH 30%異丙醇指的是NaOH的終濃度是1M，異丙醇的終濃度為30%（按照體積比）。以配置1L的1M NaOH 30%異丙醇為例，可取NaOH固體40.01g + 300ml異丙醇，用純水定容到1L，配完后0.22um濾膜過濾。如果沒有NaOH固體，以5M NaOH為例，配置100ml即為5M NaOH 20ml + 30ml異丙醇 + 50ml純水，混勻后0.22um濾膜過濾。

Q：樣本孵育過程中必須搖動嗎？需要什么特殊儀器來搖起來？
A：建議最好是旋轉孵育，使得樣本與填料接觸得更充分，能有更好的分離效果。不需要特殊的儀器，實驗室所用的搖床就可以，80rpm搖動30min。

Q：旋轉孵育過程中進入到管蓋里有影響嗎？
A：沒有影響，孵育30min后一經離心就會都會進入Exosupur^?袖珍柱中了。

Q：分離后的外泌體如何保存？
A：外泌體保存問題跟分離方法無關，是由其本身特性決定的，如果條件允許最好使用新鮮的外泌體進行實驗，凍存的外泌體容易產生團聚并出現沉淀。實際研究中，外泌體功能實驗往往需要大量的外泌體不得不分批提取保存時可-80℃保存；但做biomarker研究時，如RNA組學等，提取外泌體后需盡快完成RNA提取等后續實驗。
Q：什么樣的外泌體用袖珍柱可以提升電鏡質量？
A：電鏡下明顯有一層雜質覆蓋在表層，但能隱約看到囊泡，如下圖所示，可以考慮使用袖珍柱二次純化再次拍攝，以提升電鏡質量。如只是雜質，不可見囊泡有一定概率是只有雜質，則不建議嘗試。

說明書下載

Exosupur外泌體純化袖珍柱-ES9011.pdf
Exosupur外泌體純化袖珍柱-ES9016.pdf

引用文獻

1、Kuo Shen, Rui Zheng, Bangrui Yu, etc.,Suppression the glucose-induced ferroptosis in endothelial cells by 4OI-loading exosomes hydrogel for the treatment of diabetic foot ulcer,Chemical Engineering Journal,Volume 497,2024,154696,ISSN 1385-8947, IF=13.2 1區
衣康酸4-辛酯4OI負載外泌體水凝膠抑制葡萄糖誘導的內皮細胞鐵死亡治療糖尿病足潰瘍，使用Exosupur袖珍柱去除游離小分子藥物4OI
文獻下載鏈接：https://doi.org/10.1016/j.cej.2024.154696

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