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Exosome Product Reagents
Exosupur? 外泌體純化試劑盒，是基于分子尺寸排阻色譜SEC進行小細胞外囊泡sEV的分離純化，適用于血漿、血清等成分復(fù)雜生物樣本，以及微量血漿/血清(200μl)復(fù)雜生物樣本的外泌體分離純化，具有純度高、得率好、方便快捷等優(yōu)勢，是外泌體組學、功能研究的好助手。 本試劑盒針對1ml的常量血漿/血清到0.2ml微量血漿/血清等成分復(fù)雜生物樣本sEV分離提供系統(tǒng)性解決方案。
基于沉淀法原理的試劑盒會將所有EP濃縮在混合物中，甚至是許多游離蛋白，從而產(chǎn)生高度不純的制劑，尤其是來自復(fù)雜的富含NVEP的來源，如血漿和血清，除非僅為了減少體積(濃縮)，否則強烈不建議使用此類試劑盒。
1、Exosupur?血漿排阻柱分離血漿外泌體的各項性能數(shù)據(jù)
Exosupur?分離的血漿或微量血漿小細胞外囊泡sEV TEM電鏡、WB和nanoFCM粒徑表征。
Exosupur?1ml血漿/清排阻柱對于血漿樣本可回收最高達95%的熒光脂質(zhì)體，雜蛋白去除率高達99.5%；微量血漿/清排阻柱可回收高達94%納米顆粒，雜蛋白去除率平均為98%；
下左圖為1ml血漿/清排阻柱(ES9P14e、ES9P11e)分離1mL血漿sEV效果，下右圖為微量血漿/清排阻柱(ES9P021e、ES9P024e)分離0.2mL微量血漿sEV的效果。
下第2排圖片，Western Blot中可以看出血漿中主要的miRNA結(jié)合蛋白更少，雜蛋白更少。高純度外泌體更有利于RNA組學、蛋白組學及細胞功能學和在體實驗研究。
2、Exosupur?血漿排阻柱與其他原理血漿外泌體分離試劑盒---競品分析
使用Exosupur?血漿排阻柱和2種不同原理（膜親和法Kit-Q和沉淀法Kit-S）的市售血漿外泌體分離試劑盒，以及經(jīng)典的超離，分離血漿外泌體檢測各項指標，結(jié)果如下：
分離的血漿sEV通過WB等蛋白上樣檢測血液中主要的污染蛋白：白蛋白HSA和RNA結(jié)合蛋白Ago2、脂蛋白ApoB，結(jié)果顯示Exosupur?分離的外泌體雜質(zhì)蛋白含量更低。（原理為沉淀法的Kit-S分離的血漿外泌體相對純度更差一些）
1ml血漿分離sEV通過NanoFCM檢測粒徑分布和顆粒數(shù)，結(jié)果顯示Exosupur?分離的血漿EV尺寸分布相對較窄為小囊泡，顆粒數(shù)得率適中。（原理為沉淀法的Kit-S分離的血漿外泌體尺寸相對大一些，得率最高）
通過分離的血漿sEV particle數(shù)與蛋白含量比值評估外泌體純度，結(jié)果顯示Exosupur?分離的外泌體純度更高，雜蛋白含量更低。
數(shù)據(jù)來自于J Transl Med. 2021 Mar 12;19(1):104.
對于低表達量的長RNA， Exosupur?能夠得到更高豐度的長鏈RNA，更有利于mRNA + LncRNA研究。
數(shù)據(jù)來自于J Transl Med. 2021 Mar 12;19(1):104.
對于miRNA，由于Exosupur?富集的外泌體得率更高、純度更高，使得富集于sEV的miRNA定量值更高，而非富集miRNA定量值非常低，能夠更準確分析sEV來源miRNA。
數(shù)據(jù)來自于J Transl Med. 2021 Mar 12;19(1):104.
Protein K和RNase A雙酶消化進一步證實了Exosupur?得到的RNA更多的是來源于囊泡，而囊泡外的游離RNA檢測值更低。
Exosupur?分離的外泌體進行蛋白質(zhì)組研究時，可檢測到豐富的囊泡特異的標志物蛋白，表明外泌體純度高，可以更多檢測外泌體來源的蛋白；可檢測到比較多的蛋白數(shù)量，有利于不同樣本之間的差異分析；與已發(fā)表文章、數(shù)據(jù)庫具有較多overlap，表明數(shù)據(jù)可靠，能夠準確的對外泌體蛋白進行研究。
3、Exosupur?血漿排阻柱與同SEC原理的血漿外泌體排阻純化試劑盒---競品分析
經(jīng)過Exosupur?試劑盒收集的餾分，具有最高的particles熒光強度(即顆粒濃度)和最低的蛋白質(zhì)濃度（A和B），Particles/protein純度指標最高（C），表明Exosupur?具有最有效的EVs回收率和最低的游離蛋白質(zhì)污染、分離的EVs純度最高。
注：蛋白含量通過 BCA 法測定，particles顆粒數(shù)量通過檢測 A480 值來確定。D和E圖：使用ES9P11e分離的血漿、尿液和細胞上清來源外泌體的電鏡TEM和WB表征結(jié)果。
Q：該試劑盒分離外泌體需要自備的內(nèi)容有哪些？
A：
1．無菌PBS溶液(須用0.22μm濾膜過濾，建議新鮮配置或采購已過膜的PBS，4°C冰箱保存的PBS溶液需先平衡至室溫)；
2．20%無水乙醇(須超聲條件脫氣20min或配置好后靜置過夜)；
3．超濾管(截留分子量100kD)；
4．收集管(1.5mL EP管和15mL離心管)；
5．樣品(上樣前需平衡到室溫，單根柱子單次上樣體積為1mL)。
Q：如果是0.5ml左右的血漿樣本應(yīng)該用哪一款試劑盒？
A：直接稀釋到1ml上樣到Exosupur? ES9P11e/ES9P14e 1ml血漿排阻柱
Q：Exosupur? 微量血漿/清排阻柱的上樣0.2ml指的是原始血漿/血清嗎？
A：指的是經(jīng)過低速離心和過0.45 μm濾膜處理后的樣本，0.2ml。請注意濾膜過濾會損失約100 μl。如果只用0.2ml血漿進行濾膜過濾建議客戶再用約100 μl PBS進行二次過膜潤洗。
Q：樣本收集完了，顏色還在中間，是否有問題？
A：按照操作說明來做，就沒問題，一般是顏色滯后，因為顏色都是小分子成分，會靠后出來，外泌體會先流出，故不能以顏色作為外泌體收集的判斷。
Q：用完了是直接用封閉液沖洗，還是2部體積的PBS沖了再用1倍體積封閉液沖？
A：如果本次接著用就不用封閉液清洗；如果本次不用了，需保存起來下次用，那么本次就用PBS沖洗后再封閉液沖洗。
Q：分離后的外泌體如何保存
A：外泌體保存問題跟分離方法無關(guān)，是由其本身特性決定的，如果條件允許最好使用新鮮的外泌體進行實驗，凍存的外泌體容易產(chǎn)生團聚并出現(xiàn)沉淀。實際研究中，外泌體功能實驗往往需要大量的外泌體不得不分批提取保存時可-80℃保存；但做biomarker研究時，如RNA組學等，提取外泌體后需盡快完成RNA提取等后續(xù)實驗。
| 產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 應(yīng)用 | 說明書下載 |
| Exosupur?外泌體純化試劑盒 | ES9P11e | 適用于復(fù)雜的血漿、血清等樣本，單次上樣量1mL*1根*5次重復(fù)=5mL樣本量/5個樣本 | |
| Exosupur?外泌體純化試劑盒 | ES9P14e | 適用于復(fù)雜的血漿、血清等樣本，單次上樣量1mL*4根*5次重復(fù)=20mL樣本量/20個樣本 | |
| Exosupur?外泌體純化試劑盒 | ES9P021e | 適用于微量的血漿、血清等復(fù)雜樣本，單次上樣量0.2mL*1根*5次重復(fù)=1mL樣本量/5個微量樣本 | |
| Exosupur?外泌體純化試劑盒 | ES9P024e | 適用于微量的血漿、血清等復(fù)雜樣本，單次上樣量0.2mL*4根*5次重復(fù)=4mL樣本量/2個微量樣本 |
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國際細胞外囊泡協(xié)會（ISEV）建議的最小實驗要求（MISEV2023）中，關(guān)于基于商業(yè)化試劑盒分離EV的建議如下：
