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Exosome Product Reagents
外泌體示蹤實驗是一種用于追蹤外泌體在生物體內(nèi)或體外環(huán)境中的行為、分布和命運的實驗技術(shù)，是外泌體功能機制研究以及工程化外泌體研究的必備實驗。 FluoExo?外泌體示蹤染色試劑盒，包含了示蹤所需的熒光染料、緩沖液和袖珍柱，能夠幫助用戶快速、高效、高質(zhì)量地完成外泌體熒光標記實驗。
生物組織在紅光和近紅外區(qū)域的自發(fā)熒光較弱，因此紅色或近紅外染料更適合外泌體的體內(nèi)示蹤實驗。本試劑盒中的熒光染料為帶有長脂肪族尾巴的親脂性熒光染料，可以穩(wěn)定地整合到外泌體膜脂質(zhì)區(qū)并發(fā)出紅色熒光，兔紅細胞中標記的本染料半衰期大于100天，具有強穩(wěn)定性，有利于長期體內(nèi)追蹤研究。此外，也可用本試劑盒標記外泌體進行體外示蹤。
本試劑盒中稀釋緩沖液是對哺乳動物細胞具有等滲性，不含洗滌劑或有機溶劑，旨在于染料標記步驟中維持外泌體活性，同時最大程度地提高染料的溶解度和染色效率。
袖珍柱用于以快速、有效去除外泌體標記過程的游離熒光，獲得純化的熒光標記外泌體，即可進行外泌體示蹤研究。
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 用途 |
| FluoExo?外泌體示蹤染色試劑盒-紅色 | FE-02-01 | 1T | 可進行1次外泌體染色實驗，單次最大處理100μl外泌體（建議外泌體濃度建議高于 1E+11 particles/ml或0.5-1μg/μl） |
| FE-02-02 | 5T | 可進行5次外泌體染色實驗，最多處理100μl*5=500μl外泌體（建議外泌體濃度建議高于 1E+11 particles/ml或0.5-1μg/μl） |
幫助用戶快速、高效、高質(zhì)量地完成外泌體熒光標記實驗，并高效去除游離熒光染料，以便于進行體內(nèi)和體外外泌體示蹤實驗。
1、操作便捷，僅需2次孵育+1次純化即可完成外泌體染色。
2、高效去除游離染料：試劑盒涵蓋了去除游離熒光染料的袖珍柱，游離染料去除效果好(>90-98%）。
以不同濃度染料（2μg/ml-200μg/ml）分別上樣100μl到袖珍柱中，收集流出液，酶標儀檢測染料原液和流出液的熒光值，計算染料去除率，如上圖所示?？梢姡玖蠞舛仍?0μg/ml以上時，袖珍柱的游離染料去除率穩(wěn)定在98-99%以上。
3、外泌體回收率高：試劑盒涵蓋了去除游離熒光染料的袖珍柱，回收率高約50%左右。
分別使用5μg/ml和25μg/ml的親脂性熒光染料標記293F外泌體（Cat# CTE-06）后，上樣100μl到Exosupur?袖珍柱，收集流出液，通過納米流式測定顆粒數(shù)，計算顆?；厥章剩瑢⑿湔渲偕罄^續(xù)重復(fù)幾次實驗，如上圖所示。可見，不管使用低濃度還是中高濃度熒光染料標記的外泌體，使用袖珍柱進行幾次重復(fù)實驗，顆?；厥章氏鄬^穩(wěn)定，約在50-60%以上。
請注意：濃度越低回收率越低，建議外泌體濃度高于 1E+11 particles/ml。
按照上述操作對貨架293F外泌體CTE-06進行紅色熒光標記，加入受體細胞中孵育24h（建議熒光標記外泌體顆粒數(shù)與接種細胞比例大于5000：1），受體細胞的細胞膜和細胞核分別用綠色細胞膜染色劑和 Hoechst 標記，激光共聚焦顯微鏡掃描結(jié)果表明：標記的外泌體 (紅色) 被受體細胞攝取。
1、 制備好的熒光標記外泌體終產(chǎn)物可以保存多久？
建議盡快使用，4℃保存不超過48h。
2、 可以不去除游離染料嗎？
建議按照上述步驟進行去除，以避免游離染料對后期實驗的干擾和假陽性結(jié)果。
3、 染料標記、純化會導(dǎo)致外泌體損失嗎？
會損失，一般回收率約30%-50%以上，濃度越低損失越大。因此建議至少取 2 倍于細胞共孵育實驗所需外泌體劑量進行染料標記實驗。
4、 體外示蹤實驗，細胞培養(yǎng)時使用正常胎牛血清還是無外泌體血清？
建議使用無外泌體血清（恩澤康泰貨號EDFBS50），以提升細胞對染料標記外泌體的攝取效率。
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